实验室酶标仪专题解说
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酶标仪是一个很神奇的仪器,任何病毒或者是添加剂都无法逃出它的检测,下面我们将为您详细介绍酶标仪及酶标仪的使用问题。
酶标仪即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器,可简单的分为半自动和全自动2大类,酶标仪不仅应在医疗行业用于酶联免疫学的检测工作,而且在食品卫生,农业,畜牧等产业有着广泛的应用。
1.酶标仪在医疗行业的检测项目
过敏原,皮肤不耐受等
甲状腺:促甲状腺激素,T3T4等
糖尿病:C肽,胰岛素,胰岛素抗体,胰岛素原等
优生优育:弓形虫抗体,巨细胞病毒,风疹病毒等
不孕症:性激素六项,泌乳素,雌三醇,生长素,抗精子抗体等
传染病类:例如肝炎,艾滋病,衣原体,肺炎支原体,梅毒,水痘等
肿瘤标志物:癌胚抗原,甲胎蛋白,乳腺癌,卵巢癌,膀胱癌,胃肠癌等
2.酶标仪在食品卫生,农业以及畜牧行业的检测项目
1.营养成分
2.添加剂
3.农药残留量
4.菌毒素
5.无机毒素
6.抗生素激素残留
7.致癌物质残留
8.有毒有害物质污染等
另外酶标仪还可检测曾使人们深受其害的瘦肉精,检测结果很[accuracy]。
1.光吸收酶标仪:是用来进行可见光与紫外光吸光度的检测,特定波长的光通过微孔板中的样品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系,由此可以用来定性和定量的检测,光吸收的检测技术成熟,成本低,操作简单,但是动态范围窄,灵敏度比较低,特异性不强,一般可见光和紫外光分别采用钨灯及氘灯作为光源,而紫外/可见酶标仪是可以将两种光源进行切换,适应不同测量波长的需求。
2.荧光酶标仪:是用来进行荧光的检测,通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后,会发出波长更长的发射光,通过发射光栅后到达检测器,荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例,荧光检测灵敏度高,可实时检测,使用方便,检测模式多样,但是容易受外界干扰,激发光与发射光容易互相影响,干扰检测。
3.化学发光酶标仪:是来自生物化学反应中的自发光,可分为辉光型和闪光型两种类型,辉光型发光持久,稳定,能持续一段时间;闪光型发光时间短,变化快,稳定性不强,需要应用自动加样器才可以进行,化学发光中发出的光子数与样品量呈一定比例关系,化学发光酶标仪灵敏度非常高,动力学范围广,
4.多功能酶标仪:是以上三种酶标仪的集合,它集成了两种或者三种酶标仪于一体,可以同时进行光吸收,荧光和化学发光的检测,功能强大,使用范围广,可作为研究平台,避免了重复购买,是实验室的值得拥有,另外根据通道的个数,可以将酶标仪分为单通道和多通道两种类型,单通道又有自动和手动两种之分。
酶标仪实际上是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本。该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号。电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,[much]后由显示器和打印机显示结果。 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程。
1.酶标仪在用单波长测定吸光度时,除受到测定内源性干扰( 包括噪音、漂移、电压等) 因素外,受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中,由于液面表面张力的作用,液体的表面不是一个平面,而是形成一个凹面,从侧面看似凹透镜,这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响,光线在通过液面时,除正常的被液体吸收一部分外,尚有部分被折射和反射( 如光线通过凹透镜那样) ,影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源,如果每次能在同一部位检测,吸光度的重复性将得到保证,但由于机械运动等造成的误差,不可能保证每孔都在相同部分被检测,因此造成了孔与孔之间有一定的差异。
2.在双波长测定中,减少了测定干扰和电路干扰,因此测定结果明显好转。由于液体表面张力的不同,导致单波长测定时误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到[much]后加入底物和终止液后的液面情况,用加入表面活性剂的洗涤剂清洗后,形成的液面更凹,对单波长检测的影响更大,并且与表面活性剂的浓度成正比。而用中性蒸馏水洗涤后,单、双波长检测技术结果基本一致。
1.酶标仪应放置在低于40分贝的环境下。
2.为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。
3.操作时环境温度应在15℃-40℃之间,环境湿度在15%-85%之间。
4.操作电压应保持稳定。
5.操作环境空气清洁,避免水汽,烟尘。
6.保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。
1.开启仪器电源开关,预热5分钟,同时启动电脑。
2.启动Magellan.exe程序,加入程序主界面,仪器微孔板架同时自动打开。
3.将待测微孔板在板架上放好。
4.根据不同的测量要求,设置好测定波长和测量模式后,进行检测。
5.保存检测结果或进行打印。
6.关闭计算机和主机电源,登记使用记录。
1.洗板应清洗干净,如果条件允许,使用洗板机洗板,避免交叉污染。
2.如使用的样品或试剂具有污染性,毒性和生物学危害,请严格按照试剂盒的操作说明,以防对操作人员造成损害。
3.如仪器接触过污染性或传染性物品,记得进行清洗和消毒。
4.请勿将样品或试剂酒到仪器表面或内部,操作完成后请洗手。
5.使用加液器,加液头不能混用。
6.在测量过程中,请勿碰酶标板,以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。切记不要再测量过程中关闭电源。
7.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改,以达到理想中效果。
8.使用完后记得盖好防尘罩。
1.开机后无反应:电源未接通(应检查电源线是否接好,保险丝是否烧断)。
2.仪器无法与计算机通讯:连线不通。(首先检查计算机与仪器接口是否正确,它应与仪器后部右侧标有RS-232接口相连。因为打印机接口在其左下方可互插入,会造成接口错误发生。连线不通的另一种原因是连线本身的问题。另外还应检查计算机设置的串口是否与仪器相连。
3.仪器显示“滤光片错误”:仪器自检过程中没有接收到滤光片轮位置信号。应首先检查滤光片轮是否正确放在滤光片轮的插槽内。注意滤光片轮在自检过程中是否转动。如不转动,应拆下仪器左右侧各一固定螺丝,将机盖掀起,检查滤光片轮驱动电机的连线是否插紧在电机控制电路板上(PCBMOTCU-03)。如果该轮连续转不停止,则是检测滤光片轮位置的槽形光耦损坏。在自检过程中,滤光片轮正常转动时应能听到其转动的声音。转动声音是有间断的,其间断次数与装有滤光片的个数相同。
4.打印机不打印:连接问题(检查打印机与仪器的接口是否正确。检查打印机的连线是否有问题,可用替换法试验确定。有时是仪器与打印机接口电路板损坏,这时仪器往往显示“缺纸”或“打印机故障”。)
5.关机后仪器存储的日期和时间丢失:主电路板上的一钮扣电池电压过低所致(检查:正常电池电压为3VDC,如果低于2.6VDC便会出现上述问题)。
检测技术:荧光强度、时间分辨荧光、荧光偏振、瞬时与连续发光、紫外-可见光吸收、FRET、TR-FRET、BRET、面积扫描、光谱扫描。
少见的光学系统:窄带单色器、优化滤光片/二色镜组合,再加上三个广谱光源,令仪器在所有读板模式下都能具有超卓的性能。
兼容Take3微量检测板:兼容16道体积为2 µL的微量样品的检测,可进行低体积DNA/RNA 260nm检测,节省宝贵试剂,快速简单。
高敏感度:针对各种特定形态的专用光学元件令仪器小巧紧凑,可适用于更多检测场合。
模块化设计:可以仅购买所需功能。随着实验需求增加可轻松升级仪器。
高通量:针对筛选分析的[much]优化选择,包括 1536 孔读板模式。
酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为8或12通道,亦有单通道)检测,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和[accuracy]度等体现出来。光学系统好的话,则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。
通常,酶标仪的吸光度测定范围在0-2.5之间即可满足ELISA的测定要求。早期的酶标仪可测定的吸光度一般在0-2.5之间,但现在基本上都做了拓宽,可达到3.5以上,并且能保持很好的精密度与线性。
如Multiskan Ascent的吸光度测定范围(Abs)达0-4.0,在0-4.0范围,线性误差不超过±2.0%,在0.3-3.0吸光度范围内,测定精密度CV小于±0.2%;3.0-4.0 Abs范围内,测定精密度CV小于士0.2%。因此,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围,主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。
1.盛装待测比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板,微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,故用它作为固相载体,
2.由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光来都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。
3.酶标仪通常不仅用A,有时也使用光密度OD来表示吸光度,酶标仪可分为单通道和多通道2种类型,单通道又有自动和手动2种之分,自动型的仪器。
1.酶标仪的操作应较简单,菜单应用中文显示。
2.仪器体积不宜过大,由于实验室空间有限,因此小巧玲珑、外形美观的机型颇受用户的青睐。
3.由于酶标仪在使用过程中,经常会有样品液体外溅,所以酶标仪外壳要易于消毒、清洁。
4.对比色和打印的要求。一台好的酶标仪应能够快速进行比色和打印,可为检测人员节省大量的时间,并可确保检验结果的[accuracy]性。
5.厂商可配置易损部件。酶标仪在临床上使用频率较高,一些部件的损坏率也较高,如放酶标仪的卡夹、滑槽等。厂商能及时地配置易置易损部件,对保证酶标仪正常运行和延长期寿命是非常重要的。