美国加州大学开发了SunTag技术
[内容提要]:记者获悉到由美国加州大学Ronald Vale实验室的博士后Marvin Tanenbaum开发了一项SunTag新技术。他在目的蛋白中加入多个拷贝(多达24个)的多肽表位,将这个蛋白与能识别该表位的荧光抗体共表达。
近日,记者获悉到由美国加州大学Ronald Vale实验室的博士后Marvin Tanenbaum开发了一项SunTag新技术。他在目的蛋白中加入多个拷贝(多达24个)的多肽表位,将这个蛋白与能识别该表位的荧光抗体共表达。
一般情况下,成像细胞中的单个RNA或DNA分子是在目标分子中插入多个拷贝的特定序列,让荧光标记的蛋白能够结合上来。这个序列的拷贝数越多,目标分子结合的荧光蛋白就越多,信号也就越明亮。“何不对蛋白做这种处理呢?”加州大学Ronald Vale实验室的博士后Marvin Tanenbaum开始着手解决这个问题。
此前成像细胞内蛋白的主要方式是,在其序列中填入一个发荧光的结构域(比如绿色荧光蛋白GFP)。在一般荧光显微镜下,带GFP结构域的单个蛋白是很暗淡的,但添加太多GFP结构域又会让蛋白变得过大。
Tanenbaum为此开发了SunTag技术。他在目的蛋白中加入多个拷贝(多达24个)的多肽表位,然后将这个蛋白与能识别该表位的荧光抗体共表达。这一技术发表在近期的Cell杂志上。
“这个技术主要在于它比较简单,”Albert Einstein医学院的Robert Singer说。Tanenbaum和同事对这一系统进行了大量的优化工作,这样的努力是值得的。
SunTag在目标蛋白上添加多个微小的多肽表位(橙色),允许人们给一个蛋白添加多个标签。这些表位可以招募连有荧光标记的单链抗体scFv。
SunTag可以用来增强转录。研究人员设计了一个定位到某基因启动子区域的dCas9,在上面连接了一串多肽表位,让它携带多拷贝的转录激活子VP64,有此增加了这个基因的转录。